做ELISA確定抗原**佳包被濃度，做方陣滴定具體怎么做呢？選擇好一份已知為陽(yáng)性和陰性背景的標(biāo)本，將你的抗原用1*CBPH=*PBPH=（8個(gè)條件）后加入96孔板每孔100ul。（一般包被濃度100ng抗原或抗體/孔，**優(yōu)包被條件需進(jìn)行試驗(yàn)選擇）4度過夜取出后甩干，加入20%NBS封閉每孔200ul。37度2h熱封，甩去后拍干即可。將你HRP或AP標(biāo)記的抗原或二抗用酶標(biāo)稀釋液進(jìn)行稀釋（倍比稀釋4個(gè)梯度）即可。棋盤滴定就是板酶交叉,同時(shí)帶上陽(yáng)性、陰性通過試驗(yàn)確定**佳P/N的包被搭配E的試驗(yàn)2．抗原和抗體**佳工作濃度的確定?抗原抗體反應(yīng)要求在**適比例條件下進(jìn)行，ELISA反應(yīng)試劑多，其工作濃度不同對(duì)結(jié)果影響較大，因此必須對(duì)包被抗原(抗體)和酶標(biāo)抗體(抗原)進(jìn)行**佳工作濃度的滴定和選擇，以達(dá)到**佳的測(cè)定條件。?1）方陣(棋盤)滴定法選擇包被抗原的工作濃度用包被液將抗原作一系列稀釋。酸和鹽濃度等比例增減時(shí)，溶液的pH值不變。廣東有酚紅緩沖液供應(yīng)商

PBS緩沖液的性質(zhì)和優(yōu)點(diǎn)4.無毒性：PBS緩沖液是一種非常**的緩沖液，對(duì)生物樣品和細(xì)胞沒有毒性。5.維持穩(wěn)定性：PBS緩沖液能夠維持生物樣品的穩(wěn)定性，防止樣品的變性和降解。6.pH穩(wěn)定：PBS緩沖液的pH值一般在7.2-7.4之間，非常適合細(xì)胞和生物樣品的生長(zhǎng)和保存。7.離子平衡：PBS緩沖液中的適當(dāng)離子濃度可以提供細(xì)胞所需的離子環(huán)境，維持細(xì)胞的正常生理功能。8.易于制備：PBS緩沖液的制備非常簡(jiǎn)單，只需要將磷酸鹽和鹽溶解在適量的水中即可。中國(guó)澳門DPBS緩沖液采購(gòu)Pbs緩沖也是磷酸鹽緩沖生理鹽水，屬于等張液對(duì)于細(xì)胞并無毒性作用。

三、緩沖液使用中的注意事項(xiàng)在實(shí)際工作中有些分析人員由于不大了解緩沖溶液的作用機(jī)理，當(dāng)所配制和使用的緩沖溶液與規(guī)定的數(shù)值不相符時(shí)，為使緩沖溶液達(dá)到要求，就用鹽酸或氫氧化鈉等強(qiáng)酸、強(qiáng)堿進(jìn)行調(diào)節(jié),以為這樣做可以使緩沖溶液盡快達(dá)到所需要的pH值，然而，結(jié)果卻適得其反，這樣的溶液pH值雖然調(diào)對(duì)了，可是它的緩沖體系卻被破壞了，作用也就失去了，緩沖溶液一般都是由弱酸及其弱酸鹽或是弱堿及其弱堿鹽組成的一對(duì)共軛體。使用緩沖溶液的注意事項(xiàng)：不少緩沖溶液都含有易揮發(fā)組分，如，氨-氯化銨中的氨酷酸-醋酸鈉中的醋酸?，F(xiàn)在，不少實(shí)驗(yàn)室引入了定量加液器，用定量加液器加試劑，具有簡(jiǎn)便準(zhǔn)確誤差恒定的特點(diǎn)，特別是在做成批樣品時(shí)更顯出它的優(yōu)越性，不少同志也喜歡用它來加緩沖液，但是，應(yīng)注意緩沖液不能長(zhǎng)久存放在定量加液器中，因該器皿不密閉，易造成氨的揮發(fā)（醋酸-醋酸鈉緩沖液中的醋酸也同理），從而，導(dǎo)致溶液失效，正確的做法是緩沖液應(yīng)適量配制，使用后及時(shí)密閉并置于低溫中保存。

緩沖溶液的pH通常由酸的電離平衡常數(shù)Ka及鹽和酸的濃度以及所在的環(huán)境、溫度等因素來決定；4.75~7.25屬于正常ph范圍內(nèi)。緩沖溶液是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液，能在一定程度上抵消、減輕外加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿對(duì)溶液酸堿度的影響，從而保持溶液的pH值相對(duì)穩(wěn)定。緩沖溶液的pH值在一定的范圍內(nèi)不因稀釋或外加少量的酸或堿而發(fā)生***的變化，緩沖溶液依據(jù)共軛酸堿對(duì)及其物質(zhì)的量不同而具有不同的pH值和緩沖容量。1、酸和鹽濃度等比例增減時(shí)，溶液的pH值不變。2、酸和鹽濃度相等時(shí)，緩沖液的緩沖效率為比較高，比例相差越大，緩沖效率越低。在生物化學(xué)研究中,為什么要使用緩沖液?在使用緩沖液時(shí)應(yīng)注意那些問題?

分析測(cè)試中，在絡(luò)合滴定和分光光度法等許多反應(yīng)里都要求溶液的pH值保持在一個(gè)范圍內(nèi)，以保證指示劑的變色和顯色劑的顯色等，這些條件都是通過加入一定量的緩沖溶液達(dá)到的，所以緩沖溶液是分析測(cè)試中經(jīng)常需要的一種試劑。 采用電位滴定法測(cè)定外加酸或堿對(duì)不同配比同一種緩沖溶液的滴定曲線，不僅有助于理解緩溶液及緩沖容量的概念而且對(duì)分析測(cè)試中正確選緩沖溶液的配制方法及用量具有指導(dǎo)意義。 [3]采用電位滴定法測(cè)定緩沖溶液的滴定曲線，選擇 了常見的氨水-氯化銨緩沖溶液，分別按照不同的配比得到4種緩沖溶液，實(shí)驗(yàn)測(cè)定了強(qiáng)酸、強(qiáng)堿對(duì)緩沖 溶液的滴定曲線，滴定結(jié)果直觀清晰，對(duì)理解緩沖容 量的概念及實(shí)踐中緩沖溶液的選擇有積極的意義。 [3]使用pH計(jì)可以更準(zhǔn)確地測(cè)量pH值的變化，判斷是否為緩沖溶液。中國(guó)澳門DPBS緩沖液采購(gòu)

在生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值。廣東有酚紅緩沖液供應(yīng)商

ph值緩沖液常用三種

pH酸堿度常用的三種標(biāo)準(zhǔn)溶液：pH分別為4.0、7.0和10.0。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（應(yīng)選擇與供試液pH值接近的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液），目前標(biāo)準(zhǔn)溶液有7種，在我國(guó)一般使用以下3種溶液：（pH值在25℃時(shí)）。1.鄰苯二甲酸氫鉀（KHC8H4O4）pH4.003；0.05M。2.混合磷酸鹽（Na2HPO4）：磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉混合鹽溶液pH6.864；0.025M3.硼砂（Na2B4O7·l0H2O）pH9.182；0.01M。三種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的配置方法：1.pH4，鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：精密稱取在115±5℃干燥2～3小時(shí)的鄰苯二甲酸氫鉀[KHC8H4O4]10.12g，加水使溶解并稀釋至1000ml。2.pH7，磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（pH7.4）：精密稱取在115±5℃干燥2～3小時(shí)的無水磷酸氫二鈉4.303g與磷酸二氫鉀1.179g，加水使溶解并稀釋至1000ml。3.pH9，硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：精密稱取硼砂[Na2B4O7·10H2O]3.80g（注意：避免風(fēng)化），加水使溶解并稀釋至1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免與空氣中二氧化碳接觸。 廣東有酚紅緩沖液供應(yīng)商