第三節(jié)**的代謝與培養(yǎng)基新陳代謝(metabolism)足生物有機體基本的特征之一，是生命活動中一切生化反應(yīng)的總稱。它包括物質(zhì)的分解和物質(zhì)的合成過程。**吸收了外界的營養(yǎng)，在酶的作用下將其分解，再在酶的作用下臺成**菌體的成分。分解與合成兩個過程伴同發(fā)生，緊密相關(guān)，維持了**細(xì)胞的生命，進(jìn)行**的生長。通過檢測**系統(tǒng)及代謝產(chǎn)物的生理，來鑒定**的試驗稱生化試驗。生化試驗可分為糖代謝試驗、蛋白質(zhì)代謝試驗、鹽利用試驗和呼吸酶類斌驗4種。l.代謝試驗①氧化發(fā)酵試驗O-F；②糖（醇）類發(fā)酵試驗；③VP和甲基紅試驗2.蛋白質(zhì)代謝試驗①蛋白水解試驗；②硫化氫試驗；③吲哚試驗；④脫羧酶試驗；③脫氨試驗；⑥尿素酶試驗。3.鹽類代謝試驗①枸櫞酸鹽試驗；②丙二酸鹽利用試驗；③硝酸鹽還原試驗4．呼吸酶類試驗①氧化酶試驗；②細(xì)胞色素氧化酶試驗表IMVIC試驗對腸桿菌屬的鑒別作用菌名吲哚（I）甲基紅（M）VP（Vi）枸櫞酸鹽。DMEM高糖培養(yǎng)基能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的快速增殖。山西減血清培養(yǎng)基進(jìn)貨價

    這些重組蛋白和動物來源成分對生物制品的**性有很大影響。成本低。主要用途應(yīng)用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細(xì)胞、BHK21細(xì)胞和CHO細(xì)胞，新生牛血清用量可以從10％降至3％，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響，減少生物制品純化損失，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來干擾和差異的風(fēng)險，提高制品**性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉(zhuǎn)瓶、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞，在*苗生產(chǎn)中可以達(dá)到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，易使細(xì)胞增殖迅速，代謝旺盛，代謝產(chǎn)物對細(xì)胞有不良影響，易產(chǎn)生細(xì)胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù)，增加傳代頻率。獲取同樣的細(xì)胞量，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時間，可提高生產(chǎn)效率。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細(xì)胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細(xì)胞，在本實驗情況下12代內(nèi)細(xì)胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況，因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細(xì)胞狂犬*苗的生產(chǎn)，實踐證明效果良好。采DMEM。山西減血清培養(yǎng)基進(jìn)貨價F12培養(yǎng)基在細(xì)胞分化和基因表達(dá)研究中有重要應(yīng)用。

    體外培養(yǎng)時，一定的濃度范圍條件下，葡萄糖主要經(jīng)糖酵解循環(huán)轉(zhuǎn)化成乳酸來為細(xì)胞提供能量。（氨基酸）氨基酸在細(xì)胞內(nèi)的重要生理作用主要體現(xiàn)在以下幾個方面：①是蛋白質(zhì)的基本組成單位，用于合成蛋白質(zhì)和多肽；②可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；③某些氨基酸還具有獨特的生理作用，如甘氨酸參與生物轉(zhuǎn)化作用，丙氨酸和谷氨酰胺參與細(xì)胞內(nèi)氨的運輸?shù)?；④可轉(zhuǎn)變成糖類和脂肪，參與氧化供能。細(xì)胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體，D型氨基酸不能被利用。不同的細(xì)胞對氨基酸的需求各異，但有些必需氨基酸是細(xì)胞不能自身合成的，必須依靠外源的細(xì)胞培養(yǎng)液提供。其余非必需氨基酸，細(xì)胞可以自己合成，或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來，但是在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的非必需氨基酸可以減輕細(xì)胞在合成方面的負(fù)擔(dān)，提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。絕大部分細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求，可能因其不僅是細(xì)胞的主要氮源，且可作為細(xì)胞生長的能源物質(zhì)和嘌呤、嘧啶核苷酸的前體，另外還可直接作為細(xì)胞增殖和產(chǎn)物合成中的蛋白質(zhì)和多肽的組成成分。在缺少谷氨酰胺時，細(xì)胞會生長不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多種生理作用。

    培養(yǎng)實例2和對比培養(yǎng)例2的培養(yǎng)結(jié)果比較：蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100％；在相同條件下培養(yǎng)28d時，與1/2ms生長培養(yǎng)基相比，1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳，在平均株高、蓮座葉大小、根長、花朵數(shù)量等方面均優(yōu)于1/2ms生長培養(yǎng)基；并且，采用上述培養(yǎng)方法，不論是1/2cs生長培養(yǎng)基還是1/2ms生長培養(yǎng)基，均能獲得形態(tài)完整的花粉，且花粉活力高達(dá)％，其特點在于選擇了蘭茲貝格型擬南芥作為培養(yǎng)對象，且選擇了高度適中的培養(yǎng)盒進(jìn)行培養(yǎng)，克服了傳統(tǒng)培養(yǎng)方法無法獲得擬南芥整個生育期無菌苗的缺點，所獲無菌花***可直接用于花*離體培養(yǎng)等研究內(nèi)容。如圖2所示。培養(yǎng)實例3：油菜無菌苗培養(yǎng)與培養(yǎng)實例1不同的地方在于：步驟(1)所用種子為中雙11號油菜種子，其余完全同培養(yǎng)實例1。1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：中雙11號油菜種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100％，培養(yǎng)9d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為，葉色濃綠，莖稈粗壯、平均莖中粗為，根系發(fā)達(dá)、平均根數(shù)為(>)、平均主根長為。如圖3所示。對比培養(yǎng)例3：將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實例3，1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。無血清培養(yǎng)基確保了細(xì)胞的純凈生長。

    這里介紹熱力消毒**法。高熱破壞微生物蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，從而導(dǎo)致微生物死亡。受高熱作用后，蛋白質(zhì)分子運動加快，肽鏈連接鍵斷裂，蛋白變性凝固；細(xì)胞膜功能受損使胞內(nèi)物質(zhì)漏出，**內(nèi)外環(huán)境平衡失調(diào)。不同種類微生物對熱的耐受力不同，多數(shù)無芽胞**經(jīng)55-60℃作用30-60分鐘后死亡，100℃時迅速死亡。有芽胞**則對高溫有強的抵抗力，如肉毒芽胞梭菌煮沸需3—5小時才死亡。熱力**分干熱**法和濕熱**法兩大類，相同溫度下后者較前告效力大，其原因是：①濕熱環(huán)境中菌體蛋白易凝固；②濕熱穿透力比干熱大；③濕熱蒸氣變?yōu)橐簯B(tài)時可釋放潛熱，迅速提高被**物體的溫度。1．干熱（dryheat）**法(1)焚燒。直接點燃或在焚燒爐內(nèi)進(jìn)行，*適用于廢棄物品或動物尸體。(2)燒灼。直接以火焰**，適用于微生物學(xué)實驗室接種環(huán)、針和試管口等**。(3)干烤。在干烤箱內(nèi)進(jìn)行，加熱至150-180℃2-4小時達(dá)到**效果，適用于高溫下不變質(zhì)、不被破壞和不蒸發(fā)的物品，如玻璃器皿、瓷器，不能用于塑料、棉、紙制品。2．濕熱(moistheat)消毒**法(1)巴氏消毒法。巴氏消毒法(pasteurization)是用較低溫度殺滅液體中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐熱成分的方法。使用減血清培養(yǎng)基能減少細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。山西減血清培養(yǎng)基進(jìn)貨價

F12培養(yǎng)基確保了實驗結(jié)果的一致性和可靠性。山西減血清培養(yǎng)基進(jìn)貨價

    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份，參與細(xì)胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方（g/L）天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用**分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。其***是營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，但缺點是成分復(fù)雜，來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前***使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種**提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。山西減血清培養(yǎng)基進(jìn)貨價